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紫外分光光度法檢測(cè)肝靈飲品中五味子醇甲的方法學(xué)研究
更新時(shí)間:2018-11-19 點(diǎn)擊次數(shù):2739

采用紫外分光光度法測(cè)定肝靈飲品中五味子醇甲進(jìn)行定量檢測(cè),并對(duì)紫外分光光度法進(jìn)行方法學(xué) 研究。方法 將肝靈飲品通過濃縮,定容,超聲,稀釋等步驟處理,用紫外分光光度計(jì)在 254 nm 波長(zhǎng)下檢測(cè)五味子 醇甲的含量。結(jié)果 本方法在 0. 006 ~ 0. 078 mg /ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,R2 = 0. 999 5,回收率為 98. 33% ~ 98. 79% ,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0. 34% ~ 0. 85% 。結(jié)論 該方法具有準(zhǔn)確度高,精密度好,能夠滿足測(cè)定肝靈飲品中五 味子醇甲含量的要求。

肝靈飲品是以五味子、女貞子、甘草、葛根為主 要原料,輔以對(duì)羥基、木糖醇、純凈水經(jīng) 提取、濃縮、精制、配制、滅菌、過濾、灌裝、燈檢、包裝 制成具有對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用的飲品。 目前該產(chǎn)品已經(jīng)過毒理試驗(yàn)為無毒,并且進(jìn)行經(jīng)動(dòng) 物功能試驗(yàn)證明,具有對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù) 作用 的 保 健 功 能。五味子是木蘭科植物五味子 Schisandra chinensis( Turcz. ) Baill 的干燥成熟果實(shí)。 五味子為常用中藥,《新修本草》載“五味皮肉甘酸, 核中辛苦,都有咸味”,故有五味子之名〔1〕 。五味子 味酸、甘、性溫,歸肺、心、腎經(jīng),具有收斂固澀,益氣 生津、補(bǔ)腎寧心的功效〔2〕 。現(xiàn)代化學(xué)研究結(jié)果表 明,木脂素類成分為五味子的主要成分之一,其中五 味子醇甲具有較好的水溶性,為五味子注射劑等含 五味子的制劑中的主要活性成分。藥理學(xué)研究表 明,五味子醇甲有明顯的安定、鎮(zhèn)靜及抗驚活性,且 對(duì)大腦皮層的興奮抑制過程有調(diào)節(jié)作用〔3〕 。因此 肝靈飲品以五味子醇甲作為功效成分,有關(guān)五味子 醇甲含量檢測(cè)的方法也逐漸增多,但大部分采用高 效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)〔4 - 6〕 ,此方法雖然檢測(cè)準(zhǔn)確, 重現(xiàn)性高,但操作復(fù)雜,檢測(cè)周期長(zhǎng),費(fèi)用高〔7〕 。本 文對(duì)紫外分光光度法測(cè)定肝靈飲品中五味子醇甲含 量進(jìn)行方法學(xué)研究,旨在為五味子醇甲的含量測(cè)定 提供簡(jiǎn)便的方法,為企業(yè)的內(nèi)部檢測(cè)提供更便捷的 方法。

1 材料與方法 1. 1 材料與設(shè)備 肝靈飲品由吉林紫鑫藥業(yè)股份 有限公司提供; 五味子醇甲標(biāo)品,購(gòu)于中國(guó)藥品生物 制品檢定所; 甲醇為分析; UV1800型紫外分光光度計(jì); 超聲波處理器。 1. 2 實(shí)驗(yàn)方法 1. 2. 1 原材料處理 準(zhǔn)確量取 10 ml 肝靈飲品,并 將其濃縮蒸干,用甲醇定容到 10 ml,在 55℃ 下超聲 波處理 25 min,冷卻,用甲醇定容到 10 ml,得到檢測(cè) 樣品。 1. 2. 2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取五味子醇甲對(duì)照 品 3 mg,置于 10 ml 容量瓶中,用甲醇定容配制成濃 度為 0. 3 mg /ml 的溶液,再分別取 0. 2、0. 8、1. 4、2. 0、 2. 6 ml 于 10 ml 容量瓶中加甲醇定容至刻度〔8〕 ,分別 配制濃度為 0. 006、0. 024、0. 042、0. 060、0. 078 mg /ml 的溶液用于紫外檢測(cè)。靜置20 min 后于254 nm 處測(cè) 吸光度值,以甲醇溶液作為空白對(duì)照。 1. 2. 3 五味子醇甲含量測(cè)定 將上述的待測(cè)樣品 稀釋 100 倍后在 254 nm 波長(zhǎng)下測(cè)吸光度值,由標(biāo)準(zhǔn) 曲線求得樣品中五味子醇甲的含量。計(jì)算公式: W = C × V × N/m 式中,W - 功效成分含量( % ) ; C - 標(biāo)準(zhǔn)曲線查 得的功效成分濃度( mg /ml) ; V - 樣品所取的體積 ( ml) ; N - 稀釋倍數(shù); m - 總質(zhì)量( g) 。 2 結(jié)果與討論 2. 1 線性關(guān)系試驗(yàn) 五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的含量 與吸光度之間滿足 關(guān) 系 式 y = 35. 390x + 0. 012 6 ( R2 = 0. 999 5) ,結(jié)果表明在本實(shí)驗(yàn)中五味子醇甲標(biāo) 準(zhǔn)品含量在 0. 006 ~ 0. 078 mg 的范圍內(nèi)與吸光度呈 現(xiàn)良好的線性關(guān)系。標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 見 圖 1。樣 品 在 254 nm波長(zhǎng)處測(cè)定的吸光度值為 1. 530 9,根據(jù)樣品 的吸光 度 得 到 五 味 子 醇 甲 的 含 量 為 4. 29 mg / 100 ml > 2. 8 mg /100 ml,符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)五味子 醇甲含量的規(guī)定。

2. 2 精密度試驗(yàn) 分別準(zhǔn)確吸取稀釋后樣品液各 5 份進(jìn)行測(cè)定,用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表 1。測(cè)定樣品中五味子醇甲的平均含量為 4. 274 8 mg /ml,RSD = 0. 419% ,表明該方法精密度 良好。 2. 3 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 向已知濃度的檢測(cè)樣品中分別 加入低、中、高 3 個(gè)濃度的五味子醇甲標(biāo)準(zhǔn)品,再按 照樣品制備方法處理,共準(zhǔn)備 6 份,分別測(cè)定其吸光 度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表 2。測(cè)定 3 組的平均加標(biāo)回收率 分別 為 98. 33% 、98. 79% 、98. 50% ,RSD 分 別 為 0. 85% 、0. 58% 、0. 34% 。由此可以得到各組實(shí)驗(yàn)測(cè) 得的目標(biāo)物質(zhì)的回收率,在樣品制備過程中目標(biāo)產(chǎn) 物損失較少,加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)良好。

本實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度法對(duì)肝靈飲品中五味 子醇甲的含量進(jìn)行檢測(cè),測(cè)定結(jié)果表明,肝靈飲品中 五味子醇甲的含量為 4. 29 mg /100 ml > 2. 8 mg /100 ml,符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)五味子醇甲含量的規(guī)定,并且 R2 = 0. 999 5,表明五味子醇甲含量在 0. 006 ~ 0. 078 mg /ml 的范圍內(nèi)與吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。另 外該方法精密度高,準(zhǔn)確度良好,加標(biāo)回收率較高。 因此,紫外分光光度法是測(cè)定肝靈飲品中五味子醇 甲含量的一種簡(jiǎn)單、快捷、低成本的測(cè)定方法。

3 討論 基線調(diào)查目的在于分析居民因白血病死亡原 因,采取相應(yīng)措施,通過調(diào)查得出的結(jié)果為今后制定 有效的干預(yù)方案提供依據(jù),以及開展相關(guān)工作具有 一定的指導(dǎo)意義。根據(jù) 2009 - 2011 年居民死傷原 因報(bào)表統(tǒng)計(jì),吉林省居民因白血病死亡居于腫瘤死 因順 位 第 八 位,三年間的白血病死亡率分別為: 1. 30 /10 萬、1. 23 /10 萬和 1. 62 /10 萬。白血病死亡 年齡多分布在 40 ~ 60 歲之間。白血病分類復(fù)雜,且 近年來一直不斷改變〔1 - 2〕 ,其發(fā)病原因與病毒,感 染,放射因素,化學(xué)因素,遺傳因素,環(huán)境因素等多種 因素有關(guān)。如,沈陽(yáng)市 2002 - 2003 年白血病發(fā)病率 為 4. 83 /10 萬,標(biāo)化率為 4. 09 /10 萬,較全國(guó)白血病 平均發(fā)病率高,其原因分析可能是沈陽(yáng)市為重工業(yè) 基地,環(huán)境污染嚴(yán)重,人群暴露白血病危險(xiǎn)因素機(jī)會(huì) 較多〔3〕 。幾乎所有類型的白血病都與一些共同的 危險(xiǎn)因素相關(guān)( 例如電離輻射) ,目前已經(jīng)確定,放 射線引起的腫瘤主要是白血病。經(jīng)常接觸放射線的 醫(yī)務(wù)工作者與工人,發(fā)生癌癥的機(jī)會(huì)較多。如據(jù)美 國(guó)統(tǒng)計(jì),放射工作者患白血病的風(fēng)險(xiǎn)較一般醫(yī)生高 8 ~ 10 倍。自 1911 年 Von Jagie 等報(bào)告顯示,11 例 放射工作者患白血病后,到 1959 年已有 200 多例報(bào) 告,主要為急性與慢粒。至于慢淋,則尚無確實(shí)根 據(jù)。目前由于防護(hù)設(shè)備的改進(jìn),目前放射工作者的 年接受放射線的量,估計(jì)是過去的 1% ,即 1 rad,較 大程度降低了發(fā)病率。陳可欣等〔4〕 曾于上世紀(jì) 80 年代至 2001 年調(diào)查過天津市白血病的發(fā)病和死亡 情況,調(diào)查結(jié)果也證實(shí)白血病的總體死亡率呈緩慢 下降趨勢(shì)。目前,隊(duì)列的受照人員中大約有 8% 的 實(shí)體癌死亡例數(shù)( 46% 的白血病死亡例數(shù)) 可歸因 于輻射照射。因此,應(yīng)加大環(huán)境的綜合治理、避免劣 質(zhì)材料室內(nèi)裝修、增強(qiáng)放射工作單位的自主性管理、 明確崗位責(zé)任制和嚴(yán)格規(guī)章制度〔5〕 、減少或避免由 人為因素造成的放射事故,加強(qiáng)各地區(qū)白血病資料 的檢測(cè)收集,在各省市及全國(guó)建立白血病協(xié)作組,建 立腫瘤登記報(bào)告制度、調(diào)查其發(fā)病率〔6〕 ,早期發(fā)現(xiàn)、 早期治療,這樣可以有效地提高治療效率降低病死 率〔7〕 ,做到降低該類疾病的死亡率,提高人民健康水平。

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